分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。常用的技術(shù)包括紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、熒光分光光度法和原子吸收分光光度法。

    紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。朗伯一比爾（Lambert-Beer）定律是分光光度法定量分析依據(jù)的基本原理，其意義為：當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時,其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度b成正比，而與透光度T成比。

    紫外-可見分光光度法常用的定量方法是校準(zhǔn)曲線法，即配制一系列濃度由小到大的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測定出它們的吸光度（或透光率），以吸光度（或透光率）為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，計算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。用測定標(biāo)準(zhǔn)系列的操作條件測定待測物，測得的吸光度（或透光率）由標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程查出該樣品的濃度。

影響紫外-可見分光光度法檢測結(jié)果的主要因素有：

    1.檢測人員：樣品前處理、檢測等過程操作規(guī)范且準(zhǔn)確（試劑稱量、溶液配制、試液移取等），實驗數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)移、計算等處理過程準(zhǔn)確無誤。

    2.儀器：選用的紫外-可見分光光度法計工作正常，合適的測量條件（如波長、狹縫寬度等）；比色皿（池）潔凈程度，參比溶液的選擇，樣品測試吸光度范圍等。

    3.試劑、耗材和用水：選用的試劑純度、保存條件應(yīng)滿足方法要求；樣品空白應(yīng)不含待測物或干擾成分，若含有待測物或干擾成分應(yīng)滿足檢測方法的要求；實驗用水應(yīng)符合GBT 6682-2008分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法的要求；標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的準(zhǔn)確性（標(biāo)準(zhǔn)溶液來源、保存條件等應(yīng)滿足要求且在有效期內(nèi)）；所用量器（天平、容量瓶、移液管等）應(yīng)準(zhǔn)確等。

    4.方法：選用的檢測方法應(yīng)符合要測定的對象（如待測物性質(zhì)、待測物濃度范圍及取樣量、干擾及消除情況、存在狀態(tài)等）；顯色過程操作應(yīng)正確（試劑加入順序、加入量等），顯色時間、顯色溫度等條件應(yīng)符合檢測方法的要求，且在顯色的穩(wěn)定時間內(nèi)完成檢測。

    5.環(huán)境條件：樣品保存條件應(yīng)滿足方法要求，樣品保存期限在方法規(guī)定的時間內(nèi)，樣品保存和檢測過程無交叉污染等。

    6.質(zhì)量控制：檢測過程應(yīng)采取有效的質(zhì)量控制措施（如平行測定、加標(biāo)、質(zhì)控樣品測定等）。

    綜上所述，檢驗人員的操作，儀器、試劑和方法的適用性，環(huán)境條件等都會影響紫外-可見分光光度法的檢測結(jié)果，應(yīng)合理利用這些因素可減小對檢測結(jié)果的影響進(jìn)而提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

（檢驗分析中心  彭莉）