高壓蒸汽滅菌器適用于棉布（簽）、金屬、陶瓷、搪瓷、玻璃、耐熱用品、普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等的滅菌，是目前醫(yī)學(xué)及微生物檢測中使用廣泛，安全有效的滅菌方法。利用密閉的耐高壓蒸氣滅菌器(autoclave)，在蒸氣不外溢的條件下，使鍋內(nèi)壓力增高，隨之蒸氣溫度也增高。通常在103.4kPa壓力下蒸氣溫度達到121.3℃，維持15-20分鐘，可殺滅所有的繁殖體和芽胞。高壓蒸汽滅菌方法具有滅菌效果可靠、熱穿透力強、溫度較高、處理后可隨即進行干燥的優(yōu)點。

    高壓蒸汽滅菌器的滅菌效果關(guān)系到最終試驗結(jié)果的成敗，因此，實驗室要定期對高壓蒸汽滅菌器的滅菌效果進行監(jiān)測，目前監(jiān)測的方法主要有以下三種：

1.化學(xué)指示卡

    化學(xué)指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時，由淡黃色變?yōu)楹谏ｋS著顏色變化的深淺，并與對照色相比，可判斷滅菌效果是否達到要求?；瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會變色，影響滅菌效果的觀測。

    化學(xué)指示卡只能監(jiān)測滅菌鍋的滅菌溫度，并不能準(zhǔn)確監(jiān)測滅菌時間，通過顏色變化來達到監(jiān)測效果。優(yōu)點是使用方便快捷，缺點是不能準(zhǔn)確監(jiān)測滅菌時間。如果高壓鍋使用的頻率較高，建議每次都在需要滅菌的的材料外側(cè)使用過程化學(xué)指示卡（包外卡）作為標(biāo)識。

    化學(xué)指示卡分類：從滅菌器的使用層面上分為3類：高溫、低溫、環(huán)氧乙烷(EO)；低溫滅菌器包括：過氧化氫等離子體(plasma)滅菌器、低溫蒸汽甲醛滅菌器(LTSF))、環(huán)氧乙烷(EO)滅菌器。從滅菌化學(xué)指示卡本質(zhì)層面上可分為以下6類：

    第1類：過程化學(xué)指示卡（包外卡）用于單個物品或包裝，指示物品是否經(jīng)過了滅菌過程，以區(qū)分滅菌或為滅菌物品，包括指示膠帶、塑封袋邊緣試紙、生物指示劑標(biāo)簽等。

    第2類：特殊檢測化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）：用于滅菌器或滅菌標(biāo)準(zhǔn)的特效實驗操作，如各種B-D試紙。檢測預(yù)真空滅菌器冷空氣排出效果和飽和蒸汽的穿透效果以及漏氣情況。

    壓力蒸汽滅菌器每日使用前必須進行1次BD試驗。方法：將BD試驗專用的化學(xué)指示圖平放于實驗包的中心，用雙層包布包裹以后，將測試包水平放置于柜室底層靠近柜門與排氣口處進行實驗。除測試包外，柜內(nèi)不放置任何物品；在134 ℃，4 min后，取出BD測試紙觀察顏色變化，如BD測試紙變色一致均勻，說明冷空氣排除完全，可以使用；如BD測試紙變色不均勻，說明滅菌器有冷空氣殘留，不能使用，需要檢修。

    第3類：單一參數(shù)化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）:用于滅菌過程中單一參數(shù)的測試，如氣體濃度卡（EO、甲醛等）。

    第4類：多參數(shù)化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）具有兩個或兩個以上關(guān)鍵參數(shù)（時間、溫度、濕度、氣體濃度、蒸汽飽和程度）。

    第5類：綜合參數(shù)化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）是一種專用于對各滅菌過程中規(guī)定范圍內(nèi)的所有參數(shù)起作用的指示卡，其設(shè)定值需達到滅活值。它檢測的滅菌過程關(guān)鍵參數(shù)應(yīng)等于或超過標(biāo)準(zhǔn)ISO 1138對生物指示物的性能要求。性能等同或高于生物指示物。

    第6類：模擬化學(xué)指示卡（包內(nèi)卡）用于對各滅菌周期的所有評價參數(shù)起作用的指示卡，其設(shè)定值以所選的滅菌程序設(shè)置值為依據(jù)。周期確認(rèn)型指示劑:是滅菌循環(huán)驗證指示物。它的參數(shù)最精確。不同的指示劑必須要用于每一不同的周期中，印有顏色變化染料的紙片。

    第4、5、6類放在每一滅菌包內(nèi)，用于檢測小范圍問題，不能提示整批次微生物已被殺滅，批次檢測需要用化學(xué)批量PCD（有植入型物品是需同時放入生物監(jiān)測指示劑）

2.留點溫度計

    留點溫度計包括雙金屬留點溫度計、水銀留點溫度計。實驗室用的工業(yè)留點溫度計，設(shè)計的溫度要比體溫計高得多，一般是在負(fù)10度至300度之間。

    水銀留點溫度計是指水銀柱指示的位置不隨著溫度的下降而下降，仍留在并指示著曾經(jīng)達到過的最高點。像我們所用的體溫計就是這樣一種溫度計，留點溫度計需經(jīng)檢定合格后方可用于驗證試驗。檢測前，需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下，把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結(jié)束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致。每次監(jiān)測后留點溫度計的溫差應(yīng)在1℃之間，則說明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的。

    如果高壓鍋使用的頻率較高，建議每個月用留點溫度計對高壓鍋滅菌效果進行監(jiān)測。

3.生物指示劑

    生物指示劑是一類特殊的活微生物制品，可用于確認(rèn)滅菌設(shè)備的性能，滅菌程序的驗證，生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控等。

    將生物指示劑（嗜熱脂肪芽孢桿菌菌片）（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中,置于試驗包中心部位,化學(xué)指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層，則需放10處。

滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56±2℃溫度培養(yǎng)24-48小時，觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長，分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色，則說明芽胞已滅活。同時要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照，不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照。  

1）按結(jié)構(gòu)分可分為片狀生物指示劑和自含式生物指示劑。一般來說都是用的自含式的多，就是里面有菌片，外面是密封的安瓿。

    2）按培養(yǎng)時間可分為通用型生物指示劑和快速型生物指示劑。通用型生物指示劑根據(jù)芽孢復(fù)蘇后指示菌種新陳代謝引起培養(yǎng)液pH改變，通過酸堿指示劑變色來進行判讀，時間一般在24或48小時以上；而快速型生物指示劑根據(jù)芽孢復(fù)蘇后的酶促反應(yīng)，通過熒光進行判讀，時間一般為3-4小時，同時國外正在研發(fā)更加快速的生物指示劑，有望在1小時之內(nèi)得出結(jié)果。

    生物指示劑也是GB15981-1995《消毒與滅菌效果的評價方法與標(biāo)準(zhǔn)》中推薦使用的壓力蒸汽滅菌效果的監(jiān)測方法。優(yōu)點是能夠準(zhǔn)確監(jiān)測滅菌溫度和時間是否滿足滅菌要求，缺點是檢測鑒別所需時間較長。

示例：

嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑
型號：H3723
用途∶適用于醫(yī)院消毒、檢驗檢測、衛(wèi)生材料生產(chǎn)企業(yè)等機構(gòu)
指標(biāo)菌∶Geobacillus stearothermophilus嗜熱脂肪芽孢桿菌
芽孢數(shù)∶1×105以上
包裝∶25支／盒
壓力蒸汽滅菌生物指示劑又名嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑，是由嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片(ATCC7953)、培養(yǎng)基及塑料外殼組成自含式生物指示劑。菌片含菌量為1×105～5×105cfu/片。D值為1.3～1.9分鐘。在121℃±0.5℃飽和蒸汽條件下，存活時間≥3.9分鐘，殺滅時間≤19分鐘。 

使用方法

1.在ACE test(滅菌生物指示劑）表面的標(biāo)簽空白處，用油性筆記錄滅菌管理的必要事項。（如：滅菌處理日期、位置等）。根據(jù)標(biāo)簽的化學(xué)指示劑變化，可區(qū)分有否經(jīng)滅菌處理。 
2.將ACE test數(shù)支橫放在滅菌器內(nèi)不易被滅菌完全的位置。
3.滅菌處理后，將ACE test取出，確認(rèn)標(biāo)簽上的化學(xué)指示劑由藍色變成黑色后，放置15分鐘以上冷卻至室溫。
4.將完全冷卻后的ACE test垂直放入夾子中，直到塑料管底部完全安定，手指按夾子上部將內(nèi)部玻璃管夾破。此階段吸附芽孢的紙片接觸培養(yǎng)液，培養(yǎng)準(zhǔn)備完畢，請確認(rèn)紙片是否浸在培養(yǎng)液中并及時培養(yǎng)。
5.在56±2℃溫度間將ACE test豎著進行培養(yǎng)。為了便于對照，用同一批號未使用的ACE test，在玻璃管夾破后，同時進行培養(yǎng)。經(jīng)24小時、48小時或7天培養(yǎng)，可確認(rèn)滅菌效果。
6.確認(rèn)滅菌效果后，將標(biāo)簽取下粘貼在記錄薄留存。

(檢驗分析中心）